pCMV-N-His是晶安生物自行研發的用于在哺乳動物細胞中表達N端和His tag(His標簽)融合的目的蛋白
的表達質粒。含有CMV啟動子可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達;在多克隆位點的5'端含有一個可以編碼His標簽的序列,因此可以表達出含有His標簽的融合蛋白,可以方便地使用抗 His的抗體來識別目的蛋白,有利于目的蛋白檢測和分離純化。質粒為卡那霉素抗性。轉染細胞后,可使用G418篩選穩定表達目的蛋白的細胞株。
pCMV-N-His質粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide &nb sp; Position
CMV promoter &nb sp; 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
His tag &nb sp; 679–696
multiple cloning site &nb sp; 699–772
T7 promoter and T7 primer binding site 815–836
SV40 polyA signal &nb sp; 847–1230
f1 origin of ss-DNA replication 1368–1674
bla promoter &nb sp; 1699–1823
SV40 promoter &nb sp; 1843–2181
neomycin/kanamycin resistance ORF 2216–3007
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3008–3466
pUC origin &nb sp; 3595–4262
pCMV-N-His質粒的圖譜如下:
pCMV-N-His的多克隆位點的詳細圖譜如下:
&nb sp; His tag XmaI
SacI M H H H H H H SmaI
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGCA TCATCACCAT CACCATAGCC
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACGT AGTAGTGGTA GTGGTATCGG
PstI
BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI
701 CGGGCGGATC CAAGCTTCTG CAGGAATTCG ATATCGTCGA CAGATCTCTC
GCCCGCCTAG GTTCGAAGAC GTCCTTAAGC TATAGCAGCT GTCTAGAGAG
XbaI ApaI KpnI KpnI
751 GAGTCTAGAA CTAGTGGGCC CGGTACCTTA ATTAATTAAG GTACCAGGTA
CTCAGATCTT GATCACCCGG GCCATGGAAT TAATTAATTC CATGGTCCAT
pCMV-N-His中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-His)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I
pCMV-N-His中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pCMV-N-His once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241
SnaB I TAC|GTA 347
Nhe I G`CTAG,C 598
Sac I G,AGCT`C 656
Sac II CC,GC`GG 663
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I GC`GGCC,GC 669
PspA I C`CCGG,G 700
Xma I C`CCGG,G 700
Srf I GCCC|GGGC 702
Sma I CCC|GGG 702
BamH I G`GATC,C 707
Hind III A`AGCT,T 713
Pst I C,TGCA`G 723
EcoR I G`AATT,C 725
EcoR V GAT|ATC 733
Sal I G`TCGA,C 737
Acc I GT`MK,AC 738
Bgl II A`GATC,T 743
PaeR7 I C`TCGA,G 749
Xho I C`TCGA,G 749
Xba I T`CTAG,A 755
Spe I A`CTAG,T 761
Bsp120 I G`GGCC,C 767
Apa I G,GGCC`C 771
Pvu I CG,AT`CG 849
Bcl I T`GATC,A 1003
Mun I C`AATT,G 1096
Hpa I GTT|AAC 1109
Mlu I A`CGCG,T 1232
Dra III CAC,NNN`GTG 1462
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2121
BseR I GAGGAG 16/14 2164
Stu I AGG|CCT 2167
Cla I AT`CG,AT 2186
Kas I G`GCGC,C 2345
Nar I GG`CG,CC 2346
Ehe I GGC|GCC 2347
Bbe I G,GCGC`C 2349
Msc I TGG|CCA 2428
Tth111 I GACN`N,NGTC 2464
BsrD I GCAATG, 8 2579
Bsp1286 I G,DGCH`C 2649
Rsr II CG`GWC,CG 2862
BsiC I TT`CG,AA 3028
BstB I TT`CG,AA 3028
Bsa I GGTCTC 7/11 3335
HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3675
ApaL I G`TGCA,C 3950